Este procedimiento se lleva a cabo para preparar el tejido para ser incrustado en cera fundida. Hay tres etapas principales que participan en el procesamiento de tejidos. Estos son Fijación, deshidratación, Compensación y de impregnación, que se describen en la tabla a continuación.
Este procedimiento se lleva a cabo normalmente en una máquina de procesamiento en los laboratorios más grandes ya que es más eficiente y más rápido que con la mano.
La cera de parafina no proporciona una matriz dura suficiente para cortar secciones muy delgadas para microscopía electrónica. En su lugar, se utilizan resinas. Las resinas epoxi son los medios de comunicación incrustar más comúnmente empleado, pero también se utilizan resinas acrílicas, en particular cuando se está utilizando inmunohistoquímica.
Uno de los beneficios de la utilización de resina es que las secciones delgadas (0.35μm a 5μm) de tejido embebido en resina también se pueden cortar para microscopía de luz.
Una diferencia de la técnica a base de parafina es debido a la miscibilidad de la mayoría de epoxi y resinas acrílicas con agua en lugar esto requiere el uso de deshidratación, por lo general con etanol.
A continuación se presentan una lista de los horarios de la máquina que se puede utilizar para su procesamiento.
Horarios de Procesamiento | ||||||||||||||
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Corto fijación - Pequeño Biopsia Uso | Tiempo En Reactivo (Minutes) | Fijación Noche - tejido medio | Tiempo En Reactivo (Minutes) | 3 días fijación - tejido Supersize | Tiempo En Reactivo (Acta) | |||||||||
Formalina | 15 | Formalina | 120 | Formalina | 60 | |||||||||
Etanol | 5 | Etanol | 50 | Etanol | 480 | |||||||||
Etanol | 5 | Etanol | 50 | Etanol | 300 | |||||||||
Etanol | 10 | Etanol | 50 | Etanol | 300 | |||||||||
Etanol | 10 | Etanol | 50 | Etanol | 300 | |||||||||
Ethanol | 10 | Ethanol | 50 | Ethanol | 300 | |||||||||
Xylene | 5 | Ethanol | 50 | Xylene | 300 | |||||||||
Xylene | 10 | Xylene | 50 | Xylene | 300 | |||||||||
Xileno | 10 | Xileno | 50 | Xileno | 300 | |||||||||
Wax | 10 | Xylene | 50 | Wax | 200 | |||||||||
Wax | 15 | Wax | 60 | Wax | 200 | |||||||||
Cera | 15 | Cera | 90 | Cera | 200 | |||||||||
- | - | Cera | 90 | - | - |
Renal Horario Procesamiento Resina | ||||||||||||||
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Solución y por qué | Tiempo En Reactivo (Minutes) | |||||||||||||
Formalin Used to fix the tissue as renal biopsies are often delivered fresh in saline. | 45 | |||||||||||||
70% Alcohol – Used to dehydrate the tissue as LR White is not miscible with water. | 120 | |||||||||||||
1:1 Absolute Alcohol: LRW – Used to dehydrate further the tissue, while the LR white is used to begin impregnation of the tissue | 30 | |||||||||||||
LR White – Used to further impregnate the tissue | 45 |
After processing of tissue, it is then ready to be embedded into a wax block, which is the next step before it is ready for cutting. In major laboratories a large scale embedding centre is used for this work, as shown in the picture below.
On the embedding centre, the tissue is placed into a wax filled metallic mould and then placed on Ice to cool before it is formed as shown above. A Cassette is often used to provide a structure and support for the tissue for later microtomy. |